Laboratorio de Microscopía Electrónica de Transmisión

El microscopio electrónico de transmisión permite el estudio a nivel ultraestructural de material biológico (células y tejidos tanto animales como vegetales). La utilización adicional de técnicas inmunocitoquímicas, aporta además información funcional sobre el material sujeto a estudio. Permite también la caracterización morfológica de materiales de forma directa, así como su composición mediante técnicas espectroscópicas asociadas.

El microscopio electrónico de transmisión utiliza un fino haz de electrones acelerados a gran velocidad como fuente de iluminación. Dichos electrones atraviesan la muestra, produciéndose la dispersión de los mismos en diferentes trayectorias características de la ultraestructura del material observado. Colocando una barrera física de pequeña apertura angular por debajo del plano de la muestra, los electrones dispersados según ciertos ángulos, serán eliminados del haz, siendo la imagen formada menos intensa en aquellas zonas correspondientes a una mayor masa de la misma. La imagen de alta resolución formada es aumentada y proyectada sobre una pantalla fluorescente para su visualización en tiempo real, pudiendo registrarse digitalmente o en negativos para su estudio posterior.

• Ciencia de materiales.
• Biología Celular.
• Biomedicina
• Microbiología.
• Biología Vegetal y Animal.

• Caracterización de distintos tipos celulares.
• Estudio de la ultraestructura celular y tisular en tejidos animales y vegetales
• Localización de componentes en la ultraestructura celular mediante inmunocitoquímica.
• Reconocimiento de virus.
• Determinación de tamaño de partícula en minerales, nanopartículas, etc.
• Estudios de agregación de nanopartículas.

Preparación de Muestras

Las muestras biológicas sujetas a estudio han de ser sometidas en general, a procesos de fijación, deshidratación e inclusión en resinas, que van a proporcionar a dicho material el soporte y la dureza necesarios para su seccionamiento en cortes de un grosor aproximado de 60 nm. Una característica fundamental para la observación al microscopio electrónico de cualquier muestra biológica es la interacción que se produce entre esta y el haz de electrones. Generalmente, y con el fin de mejorar dicha interacción, es necesario un proceso de contraste de las secciones con metales pesados.Las muestras de materiales en polvo requieren, para su estudio en el microscopio electrónico de transmisión, la disolución de una cantidad muy pequeña de muestra en un disolvente orgánico inocuo para la misma, (habitualmente diclorometano, acetona o agua). Es necesario conseguir una dispersión adecuada, sumergiendo para ello la solución en un baño de ultrasonidos. La dispersión final se deposita sobre una rejilla forrada con carbón. Tras su secado, esta puede ser observada en el microscopio electrónico.

Funcionamiento del servicio

Previa a la solicitud de preparación de muestras, el usuario deberá ponerse en contacto con el Laboratorio con el fin de elegir el protocolo y las condiciones de realización del trabajo. Es importante que el usuario advierta de los posibles riesgos, ya sean tóxicos o biológicos, explicando las condiciones en que debe ser manipulado. En caso de acuerdo con el laboratorio para la realización de la preparación de la muestra se fijará fecha y hora para la entrega de la misma indicando, si es necesario, las condiciones de almacenamiento. El laboratorio está totalmente equipado para la preparación de muestras, pudiendo realizarse los procesos de fijación, postfijación, deshidratación e inclusión en resinas de tipo epoxi y acrílicas. Pueden obtenerse secciones micrométricas de material perfundido o incluido en soportes blandos con vibrotomo. En el ultramicrotomo, se obtienen secciones semifinas (1-2 µm) seriadas, que pueden ser reseccionadas a su vez en ultrafinas (60 nm). Los cortes ultrafinos se contrastan con metales pesados. En el microscopio óptico, se pueden obtener fotografías de secciones de vibrotomo o semifinas. La muestra puede recibirse en cualquier fase de la preparación completándose el proceso en el laboratorio. En aquellos casos en los que el usuario sólo requiera la utilización del microscopio electrónico, deberá igualmente ponerse en contacto con el Laboratorio e indicar la naturaleza de la muestra a observar.Para hacer uso del servicio y para efectuar las reservas de turno en el microscopio es necesario estar dado de alta como usuario del SIdI en la aplicación @LIMS.

1. Ultramicrotomo Leica Ultracut S.
2. Microscopio Electrónico de Transmisión JEOL JEM1010 (100 kV)